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HPLC流動相,十個你不知道的“坑”!

日期:2019/5/30 14:21:48 點擊:

   流動相相當于液相的血液,在使用過程中會有各種需要注意的事項。其中有些“坑”千萬要注意。

01 加入有機溶劑之后測量移動相酸堿度

   如果你用有機添加劑測量pH值,得到的pH值會與添加有機溶劑之前的值不同。然而,最重要的一點是要保持一致。如果你總是在加入有機溶劑之后測量pH值,那么務必保證在使用的方法中陳述你的步驟,這樣的話其他人就會按照統一方式進行。這種方式并不保證百分百準確,但是至少可以保持方法的前后統一。這也許會比得到精準的pH值更加重要。

02 沒有使用緩沖液

   緩沖劑的作用就是用來控制PH值并阻止其發生變化。很多其他方法會改變流動相的PH值,會引起停留時間、峰形以及峰值響應的漂移。

03 甲酸、TFA等不是緩沖劑

04 沒有在正常酸堿度范圍內使用緩沖液

   每個緩沖鹽有2個pH單位范圍寬度,在這個范圍內可以提供穩定性最佳的pH值。窗口之外的緩沖鹽不具備有效的抗pH值變化能力。要么在正確的范圍內使用緩沖劑,要么選擇一種緩沖劑可以涵蓋你所需要的pH值。

05 向有機溶液中加緩沖液

   將緩沖溶液與有機相混合,會極有可能引起緩沖液沉淀。在很多情況下,即使沉淀現象已經發生了,但仍很難被發現。記住,一定要將有機溶液加入到水相當中,這可以很好的降低緩沖液沉淀的幾率。

06 從0%用泵混合濃度梯度
   現在使用的泵可以有效的混合流動相并實現在線脫氣,但并不是使用你的方法的任何人都會配有高質量的泵。將A和B混合到一個單獨的溶液中,在100%線上運行。

   比如說通過用50ml水混合制備有機950ml起始混合物。這樣做的好處就是可以減少HPLC之間的可變性,減少系統中產生氣泡和沉淀的可能性。值得注意的是泵混合液的比例是95:5并不代表瓶體的預混合保留時間也為95:5。

07 不要使用正確的改性酸(堿)改變緩沖液
   只能使用形成你使用的緩沖鹽的酸或堿。比如磷酸鈉緩沖液應僅用磷酸或氫氧化鈉調節。
   沒有在方法中闡述有關緩沖液的全部信息,比如說在1000ml的水中加入5g磷酸鈉。

   緩沖劑的類型決定了能夠緩沖的PH范圍。所需的濃度決定了緩沖強度。5克或無水磷酸鈉和5克一水合物磷酸一鈉具有不同的緩沖強度。

08 還沒先檢查就開始添加有機溶劑

   如果上一個方法中基線B中使用過的是緩沖液,而你的方法中,基線B使用的是有機溶液,好在你可以沉淀泵管和泵頭中的緩沖劑。

09 支起瓶體清空最后一滴

   很有可能你沒有足夠的流動相完成整個操作,最后樣品會冒煙的。除了可能存在燒干泵系統和柱子的可能性之外,流動相也會蒸發的一干二凈,瓶體頂部的流動相會發生變化。

10 利用超聲脫氣的流動相
   最重要的一點就是確保所有的緩沖鹽已經溶解,但是這是一種效果最差的脫氣方式,并且它會很快讓流動相升溫,從而引起有機成分蒸發掉。為了省去之后不必要的麻煩,請用五分鐘時間使用真空過濾你的流動相。
 (來源:化工儀器網)

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